类器官培养步骤是怎样的？都有哪些注意事项？

　在动物或人类体内测试新药候选物之前，通常使用原代细胞培养物或细胞系进行体外测试。但这种测试也有一些弊端，而类器官其功能类似于体内组织，因此，更优于传统的细胞培养单层。那么，类器官培养步骤是怎样的？都有哪些注意事项？
　　目前类器官可以分为两大类：组织细胞来源类器官和多能干细胞来源类器官（如视网膜类器官、脑类器官）。类器官的构建是一项系统工程，需要物质基础和特定的培养环境。
　　类器官构建的物质基础一般包括：3D支架、含有各种生长因子的培养基及和诱导添加物以及干细胞、支持细胞或组织等；而特定的培养环境包括了调控氧气、温度、二氧化碳、甚至包括一些力学等模拟体内细胞生长环境的参数。
　　类器官培养步骤是一个精准调控细胞生长微环境的过程，根据提供个性化的培养条件来模拟细胞在体内的微环境。3D支架给细胞的生长与细胞类别的自我组织及空间结构构建提供支撑，在细胞团的作用下，因为不同细胞会分泌不同的细胞粘附因子，不同类型的细胞会运动到3D支架的不同位置，实现了细胞类型的分离。
　　由于空间的限制形成了“谱系定向”，也就是“空间限制引起的细胞命运决定”。而相应的培养基及诱导物激活或者抑制参与类器官形成的特定信号通路与稳态的维持。因此，在空间约束作用以及原来细胞分泌物或添加的诱导物的刺激等，这些细胞被进一步的分化，最终形成类器官。
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