病毒生产分离细胞后,首次传代需要注意的问题
1)、传代培养时先观察细胞的活性。
2)、细胞的活率应该超过90%,密度控制在80%左右
3)、对于无血清培养基,需要降低胰蛋白酶使用量。
(1)、 病毒生产移弃使用过的细胞培养基。
(2)、使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA清洗细胞。在培养瓶背着细胞的一面加入清洗溶液,通过转动培养瓶1到2分钟清洗细胞层,然后去除清洗液。
(3)、加入胰酶消化,消化细胞与细胞,操作手法,试剂的效价有密切的关系,消化时应注意观察细胞形态,如细胞变得椭圆透亮,并且可以观察到细胞与细胞间的间隙时,轻拍瓶身可以看见成流沙状,即可中止消化,消化时尽量减少对细胞的吹打。
(4)、当细胞*分离时,垂直放置培养瓶,让细胞流到培养瓶的底部。在培养瓶中加入*培养基中止消化,计数并再次培养细胞。
(5)、对于无血清培养基,加入大豆胰蛋白酶抑制剂。通常使用1∶1(v∶v)0.25 mg/ml胰蛋白酶抑制剂到胰蛋白酶中将抑制胰蛋白酶活性。