文章发表于：2023年03月11日 13:38:50


1、加样
　　对于间接ELISA标本一般都要进行稀释,如果加样不准就会造成误差,尤其当稀释倍数大时,很小的误差,会导致较大的相对误差,使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性).加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡.目前,大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本,可较好地避免以上误差.
　　2、洗涤
　　细胞治疗CDMO在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步,应引起操作者重视.无论是手工操作还是机器操作,得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关,ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的.通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质.
　　3、 温育
　　每种试剂都有其最合适的反应模式,其中温度和温育时间控制是重要因素.因孵育温度高,反应时间长,会造成整板本底高,阳性率高.温育一般用湿盒或水浴,反应板不宜叠放,以保证各板温度都能迅速平衡,为避免蒸发,板上应加盖.
　　4、酶标仪判读
　　作为记录测定结果的仪器,酶标仪的性能稳定与否,决定结果的可靠度.首先酶标仪应定期进行保养,对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确,使用双波长,一个检测波长,一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰.此外,在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条.由于各种酶标仪性能有所不同,使用中应详细阅读说明书
　　综上所述,由于酶联免疫吸附技术目前在技术上缺乏标准化,由于受方法学及技术条件的限制,在酶联吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性,但我们可以通过以上措施把非特异性显色降至最低限底,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果.